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BUNSEN酶聯(lián)免疫試劑盒工作原理及實驗操作步驟
酶聯(lián)免疫試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術(shù)原理，能測量人促卵泡素(FSH)，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
酶聯(lián)免疫試劑盒工作原理:
促卵泡素(FSH)是動物腦垂體分泌作用于卵巢卵泡生長、發(fā)育、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素.由于是生物大分子,不能透過細(xì)胞膜,FSH必須與靶細(xì)胞膜上的促卵泡素受體(FSHR)結(jié)合,經(jīng)過受體介導(dǎo)將信息傳遞到靶細(xì)胞內(nèi),才能發(fā)揮其生物學(xué)功能.所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(ELISA)。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體，經(jīng)生物素(biotin)標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。
酶聯(lián)免疫試劑盒工作環(huán)境:
1. 37℃恒溫箱。
2. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
3. 自動洗板機。
4. 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。
5. 蒸餾水，容量瓶等
6. 干凈的試管和Eppendof管
BUNSEN酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟:
1. 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。
2. 將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。
3. 酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng)90分鐘。
4. 反應(yīng)后用自動洗板機吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
5. 將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。
7. 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。
9. 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應(yīng)，反應(yīng)過程中，要經(jīng)常的觀察，當(dāng)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的3-4孔有 明顯的梯度藍色，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應(yīng)zui長不要超過30分鐘)。
10. 用酶標(biāo)儀在450nm測定O.D.值。
11. 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應(yīng)該×N。
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