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ELISA試驗(yàn)假陽性的原因及解決方案
更新時(shí)間:2025-09-19瀏覽:300次

  ELISA試驗(yàn)假陽性的原因及解決方案

  一、假陽性常見原因

  操作因素?

  加樣誤差(如槍頭觸碰孔壁或產(chǎn)生氣泡)或洗滌不充分導(dǎo)致非特異性吸附?。

  試劑污染或保存不當(dāng)(如TMB顯色劑避光失效)?。

  樣本因素?

  溶血樣本釋放過氧化物酶活性物質(zhì),或細(xì)菌污染產(chǎn)生內(nèi)源性HRP?。

  高濃度類風(fēng)濕因子或自身抗體干擾(如系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者)?。

  方法學(xué)因素?

  鉤狀效應(yīng):樣本中待測(cè)物濃度過高導(dǎo)致信號(hào)抑制?。

  試劑盒特異性不足(如不同廠家抗體交叉反應(yīng))?。

  二、解決方案與優(yōu)化措施

  操作優(yōu)化?

  加樣規(guī)范?:懸垂加樣至孔底,避免氣泡或劃傷孔壁?。

  洗滌:使用去離子水配制洗滌液,每次浸泡1-2分鐘,拍干力度均勻?。

  試劑管理?:顯色劑現(xiàn)配現(xiàn)用,避免反復(fù)凍融?。

  樣本處理?

  溶血樣本離心去除血紅蛋白,或使用吸附劑去除干擾物質(zhì)?。

  高濃度樣本稀釋后復(fù)測(cè),排除鉤狀效應(yīng)?。

  方法改進(jìn)?

  選擇高特異性試劑盒(如阻斷法優(yōu)于競(jìng)爭(zhēng)法)?。

  增設(shè)陰性/空白對(duì)照,校正非特異性信號(hào)?。

  復(fù)檢確認(rèn)?

  初篩陽性樣本需更換方法(如化學(xué)發(fā)光法或Western Blot)驗(yàn)證?。

  臨床樣本結(jié)合病史(如疫苗接種史、自身免疫病)綜合判斷?。

  三、擴(kuò)展工具與流程

  質(zhì)量控制工具?:使用Curve Expert 1.3優(yōu)化標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合?。

  假陽性排除流程?:

  重復(fù)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)結(jié)果;

  檢查試劑有效期及儲(chǔ)存條件;

  樣本預(yù)處理(如離心、稀釋);

  更換檢測(cè)方法或試劑盒復(fù)測(cè)?。

  四、注意事項(xiàng)

  老年人群或妊娠期女性假陽性率較高,需結(jié)合臨床評(píng)估?。

  實(shí)驗(yàn)室需定期校準(zhǔn)設(shè)備,避免環(huán)境因素(如溫度波動(dòng))影響結(jié)果?。

  注:僅供科研使用,以上資料供參考,如需具體產(chǎn)品說明請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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