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ELISA樣本稀釋操作指南：原理、方法與優(yōu)化技巧
ELISA樣本稀釋操作指南
一、稀釋原理
ELISA樣本稀釋的核心是通過(guò)精確的濃度梯度調(diào)整，使待測(cè)樣本的OD值落在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)(通常為最高標(biāo)準(zhǔn)品OD值的50%-80%)?。稀釋不足會(huì)導(dǎo)致信號(hào)飽和，過(guò)度稀釋則可能降低檢測(cè)靈敏度?。關(guān)鍵是通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本基質(zhì)效應(yīng)，選擇適當(dāng)?shù)南♂屢?如1×PBS或?qū)Ｓ孟♂尵彌_液)以保持抗原-抗體結(jié)合活性?。
二、標(biāo)準(zhǔn)操作方法
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?
采用倍比稀釋法：原液按1:2、1:4等比例逐級(jí)稀釋，推薦濃度梯度覆蓋檢測(cè)范圍(如1000 pg/mL至15.6 pg/mL)?。
使用校準(zhǔn)移液器，每步混勻后取150-300μL轉(zhuǎn)移至下一管，避免氣泡殘留?。
樣本稀釋?
血清/血漿樣本需用稀釋緩沖液至少稀釋2倍，細(xì)胞上清建議1:1稀釋?。
高濃度樣本需預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最佳稀釋倍數(shù)，確保OD值接近標(biāo)準(zhǔn)曲線中段?。
三、優(yōu)化技巧
稀釋液選擇?：含0.05% Tween-20的PBS可減少非特異性結(jié)合，脫脂牛奶(5%)適合封閉高背景樣本?。
避免誤差?：使用帶濾芯槍頭防止交叉污染，手工洗板時(shí)拍干孔內(nèi)液體?。
質(zhì)控驗(yàn)證?：每板需含空白孔和陰性對(duì)照，標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值需>0.99?。
四、常見(jiàn)問(wèn)題處理
假陽(yáng)性/陰性?：檢查樣本是否溶血或脂血，避免反復(fù)凍融?。
信號(hào)異常?：確認(rèn)酶標(biāo)試劑現(xiàn)配現(xiàn)用，顯色時(shí)間控制在15-30分鐘?。
通過(guò)規(guī)范操作和優(yōu)化策略，可顯著提升ELISA檢測(cè)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性?。
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。 Elisa試劑盒
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